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須毛癬菌LAMP試劑盒實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

更新時(shí)間:2022-10-12      點(diǎn)擊次數(shù):781

須毛癬菌LAMP試劑盒實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):

1.CTAB 溶液在低于15℃時(shí)會(huì)析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。

2.在最適條件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過(guò),某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質(zhì),特別是多糖,使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。

3.飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性,但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用ben酚和氯仿的混合液,可減輕這兩種現(xiàn)象,同時(shí)可加入適量的異戊醇(ben酚—氯仿—異戊醇=25:24:1),異戊醇的作用是消泡,并使蛋白質(zhì)層緊密,使水相和有機(jī)相分層較好。 細(xì)菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時(shí)。用無(wú)菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA 十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速,能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

操作流程:

1. 根據(jù)要保存的各樣本的體積,計(jì)算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍(如100mg組織約用1ml RNAwait);離心收集2×106細(xì)胞RNAwait的用量是1ml。

2. 將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中;

3. 快速將較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀,立即*浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0.5 cm。組織過(guò)厚則RNAwait不能有效滲入,組織中間部位的RNA不能受到保護(hù)。較小的組織(如大鼠的腎臟、脾臟,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。

4. 保存時(shí)先將樣本浸入RNAwait后置4℃冰箱過(guò)夜(4℃過(guò)夜是必需的,這樣可使RNAwait*滲入到組織中),然后轉(zhuǎn)移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃時(shí)仍為液態(tài),有結(jié)晶析出,是正常情況);或者在4℃冰箱過(guò)夜后,從RNAwait中取出組織塊,轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的標(biāo)本,反復(fù)凍融至室溫20次不影響RNA的質(zhì)量。

重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

重組人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

重組小鼠 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL8 / MCP-2 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白

重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CXCL2 / GRO2 / MIP-2 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽)

重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL5 / RANTES 蛋白 (His & mucin 標(biāo)簽)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77, Fc 標(biāo)簽)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標(biāo)簽)

重組人 CXCL4 / PF4 蛋白

重組人 CXCL12 / SDF1b 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)



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