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琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒微量法

簡要描述:琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒微量法公司正在出售的產品:M17瓊脂 英文名稱:M17 Agar 產品規格:250g M17肉湯 英文名稱:M17 Broth 產品規格:250g 乳酸桿菌選擇性瓊脂 英文名稱:Lactobacillus Selective Agar 產品規格:250g APT瓊脂 英文名稱:APT Agar 產品規格:250g

  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2023-12-27
  • 訪  問  量:1019

詳細介紹

商品介紹:

測定意義:

SDHEC 1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶,位于線粒體內膜上的一種膜結合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產能的呼吸鏈提供電子。

測定原理

SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定26-DPIP的還原速度,代表SDH酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6575

11.png 

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:

① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

沙氏瓊脂平板9cm(2~25℃)  9cm*10

2 ug pSUPER-GFP-neo pSUPER-GFP-neo 低溫運輸,-20℃保存

SS瓊脂顆粒 SS Agar 300ml/袋*10

200U 9°Nm DNA聚合 9°Nm DNA Polymerase  -20℃保存

250mL Para-formaldehyde fixative Solution   Para-formaldehyde fixative Solution   常溫保存

5nmol 接頭DNA(Hind Ⅲ-Sma I) Adaptors -20℃保存

2 ug pMXB10 pMXB10 低溫運輸,-20℃保存

B5培養基 B5 Medium 250g

1瓶 SW620細胞株 SW620 低溫運輸和保存

葡萄糖半固體培養基 Dextrose Semisolid Medium 250g

100mL RNase-Free Potassium Chloride Solution(無RNase的溶液),5M  RNase-Free Potassium Chloride Solution,5M  常溫保存

琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒微量法HPV16 E7 protein  人瘤毒16型E7抗體 規格: 0.1ml

CADM 4  細胞粘附分子4抗體 規格: 0.2ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/RBITC  羅丹明標記的兔抗牛IgM 規格: 0.3ml

B-Raf  B Raf抗體 規格: 0.1ml

HOXD10  同源盒蛋白HOXD10抗體 規格: 0.2ml

HAND1  心臟和神經嵴衍生蛋白1抗體 規格: 0.2ml

Glucagon Receptor  受體抗體 規格: 0.1ml

GABA Transporter 1/GAT-1  γ氨基丁酸運載蛋白1抗體 規格: 0.1ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/Gold  膠體金標記的驢抗豚鼠IgG 規格: 0.5ml

DOM3Z  DOM3Z蛋白抗體 規格: 0.2ml

CTAG2  瘤/睪抗原2抗體 規格: 0.2ml

ER-beta  雌激素受體β 抗體 規格: 0.1ml

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