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輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒微量法

簡要描述:輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒微量法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產(chǎn)品:慶大瓊脂平板(9cm) 英文名稱:Gentamycin Agar 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 BCYE瓊脂平板(9cm) 英文名稱:BCYE Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 GVPC瓊脂平板(9cm) 英文名稱:GVPC Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 我妻氏(9cm) 英文名稱:Wagstsuma Bloo

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2023-12-29
  • 訪  問  量:727

詳細介紹

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒微量法

100管/48樣

微量法

BK-01S6349

商品介紹:

測定意義:

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NADP+NADPH含量測定可以計算NADPNADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標志之一,而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+NADPHNADPH通過PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(MTT)還原為甲瓚,570nm下檢測吸光值,從而測定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+NADPH,從而檢測NADP+含量。

所需的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
11.png

實驗結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

改良EC肉湯(mEC+n)顆粒 Modified EC Broth 225ml/袋*10

100µL 即用型GFP標簽蛋白裂解液 GFP-Tagged Protein Lysate -20℃保存

2 ug pTCK303 pTCK303 低溫運輸,-20℃保存

4次 大提柱式動物DNAout Maxi Column Animal DNAOUT 常溫

2 ug pDR195 pDR195 低溫運輸,-20℃保存

50%卵黃乳液 50% egg Yolk emulsion 5ml*10

100mL 瓊脂糖凝膠 4B Sepharose 4B 4-8℃保存

50T 蟹特定基因序列PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

200 mL 大鼠 NK 細胞分離液1.068 Cell Separation Solution -20℃保存

100mL Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.0   Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.0   常溫保存

七葉苷生化管  20支

輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒微量法CD144/VECD/VE Cadherin  上皮型鈣粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mafa  v-maf 肌腱膜纖維肉瘤基因同源物A抗體 規(guī)格: 0.1ml

DCTN6  動力蛋白激活蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml

IFNA16/Interferon alpha 16  干擾素α16抗體 規(guī)格: 0.2ml

PAPP A2  娠相關(guān)漿蛋白A2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-TrkA (Ser791)  磷酸化酪激A抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)  磷酸化髓樣細胞白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-CY5  PE-CY5標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml

BRCA2  易基因2抗體 規(guī)格: 0.1ml

CXX1/Cerebral protein 5  腦蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

CLK3  細胞分裂周期樣激3抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD24  CD24抗體 規(guī)格: 0.1ml



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