細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

LS 180(人結(jié)腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2化鎘，英文名或英文縮寫：Cadmium iodide，級別：CP，98.5%，規(guī)格：25克

HHpC-c 人肝細胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細胞HBSMC2-安基嘌呤(2-8℃) ≥99% 2-cminopurinq 42-06-

H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源)5-(2-羧基本基)-1-(2-羥基-5-磺基本基)-3-本基甲單鈉鹽，英文名或英文縮寫：Zincon，級別：BR，0.15%，規(guī)格：250毫克

CDK1 Others Human 人 CDC2 Kinase / CDK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) L-甲狀腺素鈉5克RT

人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]Aprotinin 2mg/5mg/10mg/100mg原裝 Roche11583794001
CDC42BPB Others Human 人 CDC42BPB 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 雙嘧達莫（標(biāo)準品）Dipyridamole質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞;WPMY-1羧甲司坦（標(biāo)準品）S-Carboxymethyl-L-cysteine質(zhì)量規(guī)格：含量測定

P388D1細胞，瘤細胞 人結(jié)腸腺癌細胞,HCT-8細胞 CM-H020人胰島β細胞*培養(yǎng)基100mL硝酸異山梨酯（標(biāo)準品）Isosorbide dinitrate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

大鼠骨骼肌成肌細胞;L6月桂氮卓酮;氮酮Laurocapram質(zhì)量規(guī)格：>97%

VSIG4 Others Mouse 小鼠 VSIG4 人細胞裂解液 (陽性對照) （標(biāo)準品）Oxymetazoline 質(zhì)量規(guī)格：含量測定
小鼠T淋巴瘤細胞PRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-甲氧基酚(>98%,BR)4-Methoxyphenol質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人細胞;1301對甲基肉桂酸(>98%,BR)4-Methylcinnamic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠胰島細胞瘤細胞;INS-1 神經(jīng)上皮瘤細胞，SK-N-MC細胞 MPC細胞，小鼠垂體細胞4,5-二氟酞腈(>95.0%(GC))4,5-Difluorophthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

HT-29, 人結(jié)腸癌細胞 Human4-己氧基苯二甲腈(>95.0%(GC))4-Hexyloxyphthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

CD200R1 Others Mouse 小鼠 CD200R1 / OX-2R 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-羥基鄰苯二甲腈(>97.0%(GC))4-Hydroxyphthalonitrile質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，