PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱：洋蔥伯克氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒 
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品貨號：BK-P96958
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

產(chǎn)品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品特點：
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。

特異性熒光標(biāo)記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括絕對定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
HippuricAcidN-本甲酰甘酸5克BR，99%  轉(zhuǎn)基因玉米GA21品系試劑盒20次
鹽酸前黃素Proflavine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  Soybeanagglinin,SBAELISA試劑盒大豆凝集素(SBA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒 ，英文名： PDGF-AB ELISA Kit

阿洛西林鈉Azlocillin 質(zhì)量規(guī)格：BR,美國進口  小鼠親環(huán)素A(CYPA)ELISA試劑盒 ，英文名： CYPA ELISA Kit  MouseCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAPELISA試劑盒小鼠牛小腸堿性1酸酶(CIAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

格爾德霉素;格爾德美素Geldanamycin質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA檢測試劑盒PorcineIerferonβ,IFN-β/IFNBELISAKit 96T/48T  ELISAKitβGD小鼠β葡萄糖酸苷酶規(guī)格：48T/96T

巴佛洛霉素A1Bafilomycin A1, from Streptomyces griseus質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR  大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)試劑盒 Rat Fatty acyl-CoA syhetase,ACS ELISA Kit  Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
十九酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Nonadecanoic Acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)  MouseAi-SmoothMuscleAibody,ASMAELISAKit小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒 ，英文名： CT-1 ELISA Kit

鉍酸鈉(>80%,BC) bismuthate質(zhì)量規(guī)格：>80%,BC  小鼠腦啡肽原B(PDYN)ELISA試劑盒 ，英文名： PDYN ELISA Kit  Mouseinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISA試劑盒小鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

泛影酸鈉(>98%,BC) diatrizoate dihydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC  大鼠1脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)ELISA檢測試劑盒RatphosphatidylinositolaibodyIgG/IgM,PIAb-IgG/IgMELISAKit 96T/48T  ELISAKitBNP兔子腦素/腦尿肽規(guī)格：48T/96T

氟鋁酸鈉(>98%,BR) fluoroaluminate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  人多萜長醇二1酸寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(DDOST/OST-48)試劑盒 Human DDOST ELISA Kit  ChickenImmuneRNA,IrnaELISAKit雞核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
洋蔥伯克氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒SRS-82細(xì)胞，腹水瘤細(xì)胞 人白血病細(xì)胞,KG-1細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM932SOYPEPTONE,GMO-FREE,ANIMAL-FREE大豆蛋白胨,非動物源,非轉(zhuǎn)基因細(xì)菌學(xué)級米白色至淺褐色粉末RT不sigma

蚊子幼蟲體細(xì)胞;Aedes albopictus clone C6/36BETA-雌二醇 3-流醋內(nèi)鹽 1,3,5[10]-qSTRcTRIqNq-3,17BqTc-DIOL 3-SULFcTq wo7ium ScLT 4999-79-2

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