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肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法

簡要描述:肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法公司正在出售的產品:特級胎牛血清進口、國產Fetal bovine serum(Defined FBS) 100毫升BR新生牛血清進口、國產New born calf serum200毫升BR馬血清進口、國產Horse serum200毫升BR無菌綿羊血清進口、國產Sterile Defidrinated Sheep Blood100毫升BR

  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2023-12-24
  • 訪  問  量:687

詳細介紹

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6925

商品介紹:

測定意義:

CAD是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一,是木質素單體合成反應中的最后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。

測定原理:

CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
11.png

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:

① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

50 mg S-Methyl-ITU . sulfate(iN0S抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   常溫保存

10uL HRP標記的抗辛抗體 Anti DIG Ab,HRP 4℃保存

2 ug pAD-SV40T pAD-SV40T 低溫運輸,-20℃保存

吐溫80營養瓊脂 Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 250g

1瓶 M-619細胞株 M-619 低溫運輸和保存

10mL TE緩沖液,PH8.0  

10U 二酯Ⅱ Phosphodiesterase Ⅱ  -20℃保存

1000mL TBE Running Buffer,10X TBE Running Buffer,10X 常溫保存

100次 蛋白折疊試劑盒 Protein Folding Kit 4℃保存

2 ug pSUPER pSUPER 低溫運輸,-20℃保存

肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法CDCA1/Nuf2  細胞分裂周期相關蛋白1抗體 規格: 0.2ml

GRM2+GRM4  促代謝型谷受體2+4抗體 規格: 0.2ml

Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的羊抗人IgM 規格: 0.1ml

phospho-Tau protein(Ser202)  磷酸化微管相關蛋白抗體 規格: 0.1ml

CP110  中心體蛋白110抗體 規格: 0.2ml

factor V  凝因子5抗體 規格: 0.1ml

Calsequestrin  肌鈣集蛋白/收鈣素抗體 0.2ml

CD9/MRP-1  CD9蛋白抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgM 規格: 0.1ml

UAP56/BAT1  ATP-依賴的RNA解旋p47抗體 規格: 0.1ml

C17orf59  17號染色體開放閱讀框59抗體 規格: 0.2ml

Phospho-RSK2(Tyr529)  磷酸化核糖體S6激RSK2抗體 規格: 0.1ml



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